1、手提式灭菌器准备：先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。一般来说每次灭菌前都应该加水。加水不能太少，否则会引起烧干或者爆裂。加水加去离子水或蒸馏水，这样产生的水垢少些，而且锅体不容易被腐蚀。
2、放回手提式灭菌器灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
3、加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
4、用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间在温度或者压力达到所需时，需要切断电源，停止加热。当温度下降时，再开启电源开始加热，使温度维持在恒定的范围之内。因为温度太低达不到灭菌效果，太高可能会出危险。现在市场上手提灭菌锅实现控制自动化，不过因为灭菌压力比较大，还是有人在现场比较保险。
5、手提式灭菌器灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，10分钟后取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的液体由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。将准备灭菌的培养基及空玻璃器皿用牛皮纸包好，装入锅内套层中，物品放置不宜过多，过挤，锅内应留出三分之一空间。然后盖严锅盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，关闭锅盖上的气阀。
低温灭菌方法是利用化学灭菌剂杀灭病原微生物的方法。化学药剂进行灭菌处理时所需温度较低，通常称为低温灭菌方法或化学灭菌方法。低温灭菌使用的化学消毒剂能够杀灭所有微生物，达到灭菌保证水平，这类具有灭菌作用的化学药剂有、环氧乙烷等。化学灭菌用于不能耐受高温、湿热材质类的器械的灭菌。
常用的低温灭菌方法有过氧化氢等离子低温灭菌、环氧乙烷灭菌、低温蒸汽灭菌等。
1、过氧化氢等离子低温灭菌
通过过氧化氢液体弥散变成气体状态后对物品进行灭菌，通过产生的等离子体进行第二阶段灭菌。等离子过程还可加快、彻底分解过氧化氢气体在器械和包装材料上的残留。等离子体灭菌法的特点为作用迅速、杀菌可靠、作用温度低、清洁而无毒性残留。适用于内镜、不耐热器材、各种金属器械、玻璃等物品；能吸收水分和气体。
2、 环氧乙烷灭菌
环氧乙烷是一利无色气体，气味与相似，低浓度时无味。其气休穿透力强，可穿透玻璃纸、聚乙烯或聚氯乙烯薄膜等，对微生物的蛋白质、DNA、RNA产生非特的烷基化作用，使其失去新陈代谢的基本反应基而被杀灭，杀菌力强，杀面谱广，灭菌效果可靠，对灭菌物品损害较小等。
灭菌器分类
辐射灭菌设备：伽玛射线灭菌器。
压力蒸汽灭菌设备：预真空蒸汽灭菌器、高压蒸汽灭菌器、自动高压蒸汽灭菌器、立式压力蒸汽灭菌器、卧式圆形压力蒸汽灭菌器、卧式矩形压力蒸汽灭菌器、脉动真空压力蒸汽灭菌器、手提式压力蒸汽灭菌器。
气体灭菌设备：环氧乙烷灭菌器、轻便型自动气体灭菌器。
干热灭菌设备：干热灭菌器、微波灭菌柜。
高压电离灭菌设备：手术室用高压电离灭菌设备、病房用高压电离灭菌设备。
压力蒸汽灭菌器在一定压力下产生的蒸汽湿度高、穿透力强，能够迅速有效地杀灭微生物，是器械灭菌的主要方法之一。其特点是杀菌可靠、经济、快速、灭菌效果好。基本结构如下：
压力容器：包括灭菌室、夹套、门和其他与灭菌室相连接的部件。采用不锈钢材料，并有保温材料层。
灭菌室：放置待灭菌物品的空间
夹套：环绕焊接在灭菌室外表面的不锈钢结构，实现机械加固，灭菌室温度控制的作用。
管路系统
蒸汽进入管路：与蒸汽汽源直接相连，将蒸汽送到灭菌室或夹套。
蒸汽疏水管路：将蒸汽冷凝水排出。
灭菌室排放管路：连接灭菌室与排放管路，是灭菌室内气体及冷凝水排出外部的通道。
给水管路：为灭菌器提供工作水源。
回气管路：将灭菌室和大气相连，当内室干燥时形成真空，通过回气管路，使内室与外界大气压平衡。
自动门与灭菌室密封组件使用压缩空气或蒸汽使自动门与灭菌室密封。
干热灭菌器是由双层铁板制成的方形金属箱，外壁内层装有隔热的石棉板。箱底下放置大型火炉，或在箱壁中装置电热线圈。内壁上有数个孔，供流通空气用。箱前有铁门及玻璃门，箱内有金属箱板架数层。电热烤箱的前下方装有温度调节器，可以保持所需的温度。
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